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吖啶酯標記核酸DNA的方法

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吖啶酯標記核酸DNA的方法

2021/03/04 13:30
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化學發光試劑吖啶酯CLIA中重要的檢測試劑,外觀成黃色粉末,它的檢測靈敏度非常高,逐漸成為國內體外診斷領域主流的檢測手段。能被吖啶酯檢測標記的對象包括蛋白質、抗體、核酸DNARNA等,適應范圍廣。

在體外診斷方面,吖啶酯化學發光試劑很適合于標記DNA鏈以制造化學發光DNA探針,本文將介紹一種吖啶酯標記核酸的方法。

化學發光試劑吖啶酯

核酸是所有生物分子中最重要的物質,廣泛存在于所有動植物細胞、微生物體內,核酸分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)兩大類?,F代醫學研究成果表明,許多疾病如癌癥和遺傳疾病的發生都與DNA的突變有關,且許多傳染性疾病是由環境中的病毒、病菌或寄生蟲引起的,因此,對病毒特定序列DNA的分析有利于疫情的控制。

在核酸雜交分析中,制備特異性強、靈敏度高的標記探針是核酸雜交分析成功的關鍵,吖啶酯衍生物可以直接標記在核酸探針上,不需催化劑且發光量子產率不受影響;另外,在一定條件下,未雜交的單鏈DNA上標記的吖啶酯被水解破壞,只有雜交形成的雙鏈保護的吖啶酯才能產生化學發光,不需分離即可監測整個雜交過程。

這種吖啶酯標記核酸的方法,主要包括3個步驟,首先分別對DNA探針5’端、3’端進行保護;然后進行吖啶酯標記,最后HPLC純化分離DNA。其中吖啶酯標記最為關鍵,將25mM 吖啶酯溶解于二甲基亞砜(DMSO)中,配置1M HEPES緩沖液(PH8.0),按照摩爾比核酸探針:吖啶酯=1:5的條件,加入到HEPES緩沖液中,37℃溫度下反應1h。

這種方法創造性的在DNA兩端都標記了吖啶酯,進一步提升了檢測的靈敏度。吖啶酯具有反應條件溫和、重現性好、發光效率高、發光強度強等優點,廣泛應用于無機有機化合物、環境監測、生物及藥物分析等領域,另外也普遍用于多種類型疾病的靈敏檢測和診斷。

吖啶酯化學發光試劑包含吖啶酯與吖啶磺酰胺兩種類型,德晟研發的共有六種吖啶酯試劑,可滿足標記蛋白質、抗體、核酸等分子的不同需求。

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